目的  探索一种快速分离和培养新生大鼠心肌细胞的方法，比较心肌细胞和成纤维细胞的形态差异。方法  胰蛋白酶消化法分离新生大鼠心肌细胞进行体外培养，差速贴壁法纯化心肌细胞，倒置显微镜跟踪观察心肌细胞的生长及搏动情况，台盼兰负染法检测心肌细胞活力，通过HE染色观察心肌细胞和成纤维细胞的形态学差异。结果  接种24 h后细胞全部贴壁，部分细胞开始自发性搏动，48 h后，细胞体积增大，并伸出伪足，形状以三角形和梭形为主，3 d后细胞聚集成片并同步搏动且细胞活力均在90%以上。心肌细胞为梭形或三角形，胞质致密，多为单核细胞；心肌成纤维细胞呈泡状，双核和三核细胞较多，培养过程中不发生搏动。结论  胰蛋白酶消化法培养新生大鼠心肌细胞快速有效，差速贴壁法纯化的心肌细胞可用于实验研究。