[1]韩鹏飞,陈雪利,张贵虎,等.类弹性蛋白多肽的原核表达与纯化[J].新乡医学院学报,2020,37(2):113-115.[doi:10.7683/xxyxyxb.2020.02.003]
　HAN Pengfei,CHEN Xueli,ZHANG Guihu,et al.Prokaryotic expression and purification of elastin-like polypeptides[J].Journal of Xinxiang Medical University,2020,37(2):113-115.[doi:10.7683/xxyxyxb.2020.02.003]
点击复制

类弹性蛋白多肽的原核表达与纯化
分享到：

《新乡医学院学报》[ISSN:1004-7239/CN:41-1186/R]

卷:
37
期数:
2020年2
页码:
113-115
栏目:
基础研究
出版日期:
2020-02-05

文章信息/Info

Title:
Prokaryotic expression and purification of elastin-like polypeptides
作者:
韩鹏飞1; 陈雪利1; 张贵虎2; 闫　梦1; 徐丹华1; 王小引1; 王天云1
（1.新乡医学院基础医学院河南省药物蛋白表达系统国家联合实验室，河南　新乡　453003；2.国网平顶山供电公司职工医院外科，河南　平顶山　467000）
Author(s):
HAN Pengfei1; CHEN Xueli1; ZHANG Guihu2; YAN Meng1; XU Danhua1; WANG Xiaoyin1; WANG Tianyun1
(1.International Joint Research Laboratory for Recombiant Pharmaceutical Protein Expression System,College of Basic Medicine,Xinxiang Medical University,Xinxiang 453003,Henan Province,China;2.Department of Surgery,Staff Hospital of State Grid Pingdingshan Power Supply Company,Pingdingshan 467000,Henan Province,China)
关键词:
类弹性蛋白多肽; 原核表达; 相变温度; 蛋白纯化
Keywords:
elastin-like polypeptides; prokaryoticexpression; transition temperature; protein purification
分类号:
R318；Q816
DOI:
10.7683/xxyxyxb.2020.02.003
文献标志码:
A
摘要:
目的　构建类弹性蛋白多肽（ELPs）的表达质粒并获得类弹性蛋白多肽。方法　构建含ELPs的原核表达载体，转化E.coli BL21感受态细胞，异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷诱导ELPs蛋白表达并对其进行纯化，聚丙烯酰胺凝胶电泳检测蛋白纯度。结果　成功构建pET-28a-ELPs原核表达载体，在相对分子质量55 000"处出现目的条带，与目的蛋白分子量大小一致，蛋白纯度为95%。结论　成功表达并纯化出ELPs蛋白，为ELPs在组织工程方面的应用奠定了基础。
Abstract:
Objective　To construct a expression plasmid of recombinant protein elastin-like polypeptides (ELPs) and obtain ELPs.Methods　The prokaryotic expression vector containing ELPs was constructed and was transformed E.coli BL21 competent cells.The expression of ELPs protein was induced by isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside,and the expressed ELPs protein were purified.The purity of protein was detected by polyacrylamide gel electrophoresis.Results　The prokaryotic expression vector of pET-28a-ELPs was successfully constructed.The target band appeared at molecular weight of 55 000 and the molecular weight of the target band was the same as the target protein;the purity of the protein was 95%.Conclusions　ELPs are successfully expressed and purified,which laid a foundation for the application of ELPs in tissue engineering.

参考文献/References:

［1］　黄凯宗，王文研，张光亚．类弹性蛋白多肽及其在生物医学材料的应用［J］．中国生物工程杂志，2010，30（5）：128-132．
［2］　张立超，葛高顺，胡学军．融合蛋白ELP30-Trx的表达及PEG8000对其相变温度的影响［J］．生物技术，2013，23（5）：36-39．
［3］　张敏，张鑫宇，夏晓莉，等．类弹性蛋白多肽融合犬β干扰素的表达纯化和抗病毒活性及体外半衰期的研究［J］．中国兽医科学，2016，46（12）：1543-1549．
［4］　徐光宇，张鑫宇，夏晓莉，等．类弹性蛋白多肽融合犬λ干扰素的表达、纯化及抗病毒活性研究［J］．扬州大学学报(农业与生命科学版)，2016，37（3）：1-5，14．
［5］　刘文俊，吴倩，高慧，等．类弹性蛋白和内含肽融合表达纯化重组人防御素3［J］．扬州大学学报(农业与生命科学版)，2014，35（4）：1-5，9．
［6］　任艳艳，庄嘉楠，荣娜，等．温敏类弹性蛋白多肽的基因设计及重组克隆表达［J］．基因组学与应用生物学，2019，38（1）：56-62．
［7］　SELIG O,CUNHA A V,VAN ELDIJK M B,et al.Temperature-induced collapse of elastin-like peptides studied by 2DIR spectroscopy［J］.J Phys Chem B,2018,122(34):8243-8254.
［8］　BANKI M R,FENG L A,WOOD D W.Simple bioseparations using self-cleaving elastin-like polypeptide tags［J］.Nature Methods,2005,9(9):659-661.
［9］　GAGNER J E,KIM W,CHAIKOF E L.Designing protein-based biomaterials for medical applications［J］.Acta Biomater,2014,10(4):1542-1557.
［10］　ROBERTS S,DZURICKY M,CHILKOTI A.Elastin-like polypeptides as models of intrinsically disordered proteins［J］ .FEBS Lett，2015,589(19 Pt A):2477-2486.
［11］　孙威，林建，申欢，等．OjCHS原核表达载体的构建及重组蛋白的纯化［J］．安徽农业大学学报，2018，45（6）：1102-1106．
［12］　张秀霞，向泽敏，李娟，等．pET28a-Chaperonin 10重组载体的构建及SARS-CoV蛋白高效表达［J］．中国生物制品学杂志，2006，19（5）：471-473．
［13］　云妙英，王涛，张京文，等．人白介素-2重组基因的T载体和pET28a表达载体的构建［J］．中央民族大学学报（自然科学版），2008，17（2）：48-51,93．
［14］　吴思思，蒋维．人生长分化因子11基因原核表达质粒的构建、表达及其蛋白的纯化［J］．中国生物制品学杂志，2018，31（7）：723-727．
［15］　刘卫超，程咏梅，邓超,等．GST-His-HeparinaseⅠ双标签融合蛋白的原核表达与纯化［J］．工业微生物，2014，44（5）：51-57．
［16］　张秀霞，向泽敏，李娟，等．pET28a-Chaperonin 10重组载体的构建及SARS-CoV蛋白高效表达［J］．中国生物制品学杂志，2006，19（5）：471-473．
［17］　SVENSSON J,ANDERSSON C,RESELAND J E,et al.Histidine tage Fusion increases expression levels of active recombinant amelogein in Escherichia coli［J］.Protein Expr Purif,2006,48（1）:134-141.
［18］　DORAY B,CHEN C D,KEMPER B.N-terminal deletions and His-tag fusions dramatically affect expression of cytochrome P450 2C2 in bacteria［J］.Arch BiochemBiophys,2001,393(1):143-153.
［19］　NARMANDAKH A,BEARNE S L.Purification of recombinant mandelate racemase:improved catalytic activity［J］.Protein Expr Purif,2010,69 (5):39-46.
［20］　SAYARI A,MOSBAH H,VERGERR,et al.The N-terminal His-tage affects the enantioselectivity of staphylococcal lipases:a monolayer study ［J］.J Colloid Interface Sci,2007,313(1):261-267.

相似文献/References:

[1]杨 塌 ． 田玉慧,高 革,杨献军.人结核分支杆菌HSP70的原核表达质粒的构建及诱导表达[J].新乡医学院学报,2002,19(05):355.
[2]武慧娟,田 田,王 露,等.人β-微管蛋白2C蛋白的原核表达与纯化[J].新乡医学院学报,2009,26(03):220.
　WU Hui-juan,TIAN Tian,WANG Lu,et al.Prokaryotic expression and purification of human beta tubulin 2C protein[J].Journal of Xinxiang Medical University,2009,26(2):220.
[3]苗成,张建璞.人TAT-PDX-1融合蛋白原核表达载体的构建[J].新乡医学院学报,2011,28(03):304.
[4]陈雪利,胡婧婧,王天云,等.重组丝氨酸蛋白酶抑制剂蛋白的密码子优化及原核表达[J].新乡医学院学报,2020,37(12):1126.[doi:10.7683/xxyxyxb.2020.12.005]
　CHEN Xueli,HU Jingjing,WANG Tianyun,et al.Codon optimization and prokaryotic expression of recombinant Vaspin protein[J].Journal of Xinxiang Medical University,2020,37(2):1126.[doi:10.7683/xxyxyxb.2020.12.005]
[5]曹　顺,杨玉露,徐光华,等.重组人白血病抑制因子的原核表达及优化[J].新乡医学院学报,2019,36(3):228.[doi:10.7683/xxyxyxb.2019.03.006]
　CAO Shun,YANG Yu-lu,XU Guang-hua,et al.Prokaryotic expression and optimization of recombinant human leukemia inhibitory factor[J].Journal of Xinxiang Medical University,2019,36(2):228.[doi:10.7683/xxyxyxb.2019.03.006]
[6]王　琪,李超堃,李　敏,等.γ-氨基丁酸受体ρ2亚基重组蛋白构建及表达[J].新乡医学院学报,2018,35(1):001.[doi:10.7683/xxyxyxb.2018.01.001]
　WANG Qi,LI Chao-kun,LI Min,et al.Construction and expression of a recombinant protein with γ-aminobutyric acid type C receptor ρ2 subunits[J].Journal of Xinxiang Medical University,2018,35(2):001.[doi:10.7683/xxyxyxb.2018.01.001]
[7]徐　飞,冯继伟,李　鹏,等.流行性乙型脑炎病毒SA14-14-2株囊膜蛋白的原核表达及其兔抗血清的制备[J].新乡医学院学报,2022,39(2):101.[doi:10.7683/xxyxyxb.2022.02.001]
　XU Fei,FENG Jiwei,LI Peng,et al.Prokaryotic expression of envelope protein of epidemic encephalitis B virus strain SA14-14-2 and preparation of its specific rabbit anti-sera[J].Journal of Xinxiang Medical University,2022,39(2):101.[doi:10.7683/xxyxyxb.2022.02.001]
[8]张青苗,王雯雯,张会勇,等.分枝杆菌热休克蛋白65重组质粒的构建与原核表达[J].新乡医学院学报,2016,33(12):1028.[doi:10.7683/xxyxyxb.2016.12.003]
　ZHANG Qing-miao,WANG Wen-wen,ZHANG Hui-yong,et al.Construction and prokaryotic expression of recombinant plasmid of heat shock protein 65 from Mycobacterium[J].Journal of Xinxiang Medical University,2016,33(2):1028.[doi:10.7683/xxyxyxb.2016.12.003]

更新日期/Last Update: 2020-02-05