含ＭＹＮＤ结构域的锌指蛋白１０的原核表达及其多克隆抗体的制备-《新乡医学院学报》

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摘要:: 目的　表达纯化含ＭＹＮＤ结构域的锌指蛋白１０（ＺＭＹＮＤ１０）的重组蛋白并制备其大鼠多克隆抗体。方法　全基因合成ＺＭＹＮＤ１０基因的开放阅读框，构建原核表达载体ｐＥＴ２８ｍＺＭＹＮＤ１０。在大肠杆菌中诱导表达ＨｉｓＺＭＹＮＤ１０，利用Ｈｉｓ标签镍柱纯化ＨｉｓＺＭＹＮＤ１０重组蛋白，并用泛素样蛋白酶１除去重组蛋白的Ｈｉｓ标签。用纯化蛋白免疫大鼠，蛋白Ａ／Ｇ混合琼脂糖纯化血清得到抗体。通过Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ和免疫沉淀方法鉴定抗体的特异性。结果　成功构建原核表达载ｐＥＴ２８ｍ ＺＭＹＮＤ１０，并获得可溶性表达。利用Ｈｉｓ柱得到高纯度的重组ＺＭＹＮＤ１０抗原，免疫大鼠后纯化得到的ＺＭＹＮＤ１０多克隆抗体可以检测到Ｂ１６Ｆ１０细胞中过表达及内源性表达的ＺＭＹＮＤ１０蛋白，并可用于免疫沉淀实验。结论　本实验成功制备了ＺＭＹＮＤ１０的多克隆抗体，为后续探索ＺＭＹＮＤ１０在肿瘤细胞中的功能奠定了基础。