[1]郭娟,姚朝阳,邵强,等.黄粉甲抗冻蛋白TmAFP72在毕赤酵母中的克隆、表达及理化性质[J].新乡医学院学报,,():000.
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黄粉甲抗冻蛋白TmAFP72在毕赤酵母中的克隆、表达及理化性质
《新乡医学院学报》[ISSN:1004-7239/CN:41-1186/R]
- 卷:
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- 期数:
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2013年10期
- 页码:
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000
- 栏目:
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基础研究
- 出版日期:
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文章信息/Info
- 作者:
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郭娟；姚朝阳；邵强；
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郑州人民医院检验科；新乡医学院基础医学院；河南师范大学生命科学学院；
- Author(s):
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GUO Juan;YAO Zhao-yang;SHAO Qiang
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Department of Clinical Laboratory,People’s Hospital of Zhengzhou;School of Basic Medical Sciences,Xinxiang Medical University;College of Life Science,Henan Normal University;
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- 关键词:
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抗冻蛋白; 真核表达; 毕赤酵母; 抗冻活性
- 分类号:
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R915
- 摘要:
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目的通过对黄粉甲抗冻蛋白TmAFP72进行基因克隆、表达,获得目的蛋白并分析该蛋白在不同条件下的理化性质。方法聚合酶链反应(PCR)扩增目的基因afp72,克隆到pUCm-T载体中测序并保存。双酶切法将afp72基因定向重组到毕赤酵母表达载体pPIC9K中。将重组质粒转化人毕赤酵母GS115,筛选出重组菌株。用甲醇诱导目的蛋白表达,通过聚丙烯酰胺凝胶电泳和银染鉴定。用细菌抗冻法检测抗冻蛋白在不同酸碱条件下的活性,及经100℃不同热处理时间下的抗冻活性。结果PCR扩增获得目的基因片段afp72,克隆质粒pUCm-T与afp72重组获得了质粒pUCm-T-afp72。成功构建了真核表达载体pPIC9K-afp72,抗冻蛋白TmAFP72经诱导后获得表达。TmAFP72在较广的pH范围和较高的温度内均具有稳定性。结论真核表达载体pPIC9K-afp72成功构建,并表达出目的抗冻蛋白TmAFP72,为扩大生产规模及深入研究该抗冻蛋白的性质和应用奠定基础。更多还原
更新日期/Last Update:
2013-10-20