《新乡医学院学报》  2009年03期 220-224   出版日期：2009-01-20   ISSN:1004-7239   CN:41-1186/R

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人β-微管蛋白2C蛋白的原核表达与纯化

 

目的     构建体外原核表达和纯化人β-微管蛋白2C（TubB2C）蛋白。

方法     通过聚合酶链反应（PCR）扩增出人TubB2C基因完整开放读码框架（ORF），并插入pGEX -6P -1载体中构建pGEXTubB2C重组质粒。经大肠杆菌BL21转化后，用异丙醇-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）诱导谷胱甘肽S转移酶（GST）TubB2C融合蛋白表达，用免疫印迹（Western blot）分析鉴定表达的GST-TubB2C蛋白，并在非变性条件下利用Glutathione Sepharose 4B纯化GST-TubB2C蛋白。

结果      酶切分析和DNA测序表明TubB2C cDNA完整ORF以正确的阅读框架插入pGEX-6P-1载体；聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）结果显示表达的GST-TubB2C蛋白相对分子量约为78 000，Western blot 结果显示该融合蛋白可被抗GST抗体特异性识别。纯化后的GST-TubB2C蛋白纯度约90％。

结论    TubB2C蛋白可在体外大量表达和纯化。