《新乡医学院学报》  2011年02期 165-168   出版日期:2011-03-20   ISSN:1004-7239   CN:41-1186/R
Ku70 基因RNA 干扰载体的构建及干扰效果鉴定


目的构建靶向Ku70 基因的RNA 干扰( RNAi) 表达载体并进行RNAi 效果鉴定。方法设计3 个针对
Ku70 基因的小干扰RNA( small interfering RNA, siRNA) ,转染Hela 细胞系。在转染24、48、72 h 后,通过免疫印迹分析
检测Ku70 蛋白的表达量。把RNAi 效果最显著的siRNA 设计成短发夹RNA( short-hairpin RNA, shRNA) ,克隆入pSilencerTM
4. 1-CMV hygro 载体,转染Hela 细胞系并筛选稳转细胞株,在mRNA 和蛋白水平,评估Ku70 siRNA 的干扰效
果。结果siRNA 转染Hela 细胞24、48 h 后,Ku70 蛋白的表达没有显著变化,但在72 h 后,蛋白的表达量显著下降。
在具有稳定表达siRNA 的稳转细胞株中,Ku70 基因的表达在mRNA 水平和蛋白水平都受到了非常明显的抑制。结
论成功构建靶向Ku70 基因RNAi 载体,并筛选出效能最优序列,为进一步研究Ku70 基因的表达与宫颈癌放射治疗
敏感性的关系奠定了基础。