目的构建编码人结核分支杆菌(TB)热休克蛋白70(HSP70)的Dnak基因的重
组原核表达质粒，并研究其表达动力学。方法 质粒pMT70用限制性内切酶消化、核酸体外
扩增(PCR)及末端修饰后可获得Dnak基因全长，与大肠杆菌质粒pRSET连接重组，阳性克隆
经酶切分析鉴定后即为质粒pMT703，转入受体菌BL21DE3中，经诱导剂异丙基硫代一p—D
一半乳糖(IPTG)诱导，由SDS—PAGE、Western—blot鉴定，并以薄层扫描分析。结果 重组
表达质粒pMT703构建成功，可在大肠杆菌中高效表达，诱导后1 h即开始表达，16 h达高峰
期。表达量占菌体总蛋白的65％ ，可溶性产物占总表达量的90％ 。结论pMT703质粒不仅
构建成功且更有利于对分支杆菌HSP70蛋白的纯化，方便对其抗结核、抗肿瘤的研究。